De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

De functie van Munc18-1 in de gereguleerde afgifte van synaptische blaasjes. Het onderzoeken van nieuwe interactoren m.b.v. het yeast two hybrid systeem

Rechten: Alle rechten voorbehouden

De functie van Munc18-1 in de gereguleerde afgifte van synaptische blaasjes. Het onderzoeken van nieuwe interactoren m.b.v. het yeast two hybrid systeem

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

De communicatie tussen neuronen zorgt ervoor dat wij dingen uit onze omgeving waarnemen, opnemen en verwerken. Neuronen communiceren met elkaar d.m.v. afgifte van chemische boodschappers, neurotransmitters, die vrij komen in de synaps. Deze neurotransmitters zijn verpakt in blaasjes die in het presynaptische neuron aanleggen, voorbereid worden en versmelten met de celmembraan waardoor de neurotransmitter vrij komt in de synaps en het signaal door gegeven kan worden aan het volgende postsynaptische neuron.
Een heel scala van verschillende eiwitten in het presynaptische neuron controleren samen de efficiëntie van de synaptische signaaloverdracht. Het SNARE complex speelt hierin een zeer belangrijke rol. De SNARE eiwitten zijn samen met het eiwit Munc18-1 verantwoordelijk voor de regulatie van de secretie van blaasjes in allerlei organismen. Een van de SNARE eiwitten, Syntaxin-1 is een sterke interactor van Munc18-1. Munc18-1 is essentieel voor de communicatie tussen neuronen: wanneer er spraken is van een deletie in het gen Munc18-1, is er geen communicatie meer mogelijk tussen neuronen. Om de functie van Munc18-1 nader te onderzoeken, richt deze studie zich op het vinden andere, nieuwe interactoren van Munc18-1.
Om nieuwe interactoren van Munc18-1 te identificeren, is het yeast two hybrid systeem gebruikt. Hierbij wordt gebruik gemaakt van een mutant Munc18-1, genaamd Munc18-1DD. In deze mutant zijn twee serine (S) aminozuren op de plaatsen 306 en 313 veranderd in twee asparaginezuur (D) aminozuren (S306D en S313D). Deze mutatie zorgt ervoor dat Syntaxin-1 een sterk verminderde affiniteit heeft voor Munc18-1, hierdoor zijn wij in staat nieuwe eiwitten te vinden die (vaak) een lagere affiniteit hebben voor Munc18-1.
Uit de yeast two hybrid screen zijn twintig verschillende (deel) eiwitten geïdentificeerd die binden aan de mutant Munc18-1DD. Hieruit zijn drie eiwitten gekozen om verder te onderzoeken, namelijk de eiwitten Exocyst complex component 3 (Sec6), Mitogen activated protein kinase 1 (Mapk 1) en 3 (Mapk 3). Deze drie eiwitten zijn tevens positief getest op binding activiteit met Munc18-1 wild type in gist m.b.v. het Y2H systeem. Om de Y2H interactie te verifiëren wordt een co-immunoprecipitatie uit HEK293 cellen gedaan. Wanneer de co-immunoprecipitatie tegen Munc18-1 wordt gedaan en deze eiwitten worden aangekleurd d.m.v de Flag-tag, lijkt het er op dat er een binding plaats vindt tussen Sec6 en Munc18-1. In contrast met eerdere bevindingen in het lab is het helaas niet gelukt om de binding tussen Munc18-1 en Mapk 1 en 3 te reproduceren. Omdat Mapk 1 en 3 zijn aangetoond als interactor van Munc18-1 in eerdere co-immunoprecipitaties zullen zij waarschijnlijk wel een interactie kunnen aan gaan met Munc18-1 en hierbij een belangrijke kunnen spellen in de gereguleerde afgifte van synaptische blaasjes. Waarschijnlijk zijn technische problemen de oorzaak van het niet kunnen aantonen van de interactie in de co-immunoprecipitaties die ik heb uitgevoerd.

Toon meer
OrganisatieHogeschool Utrecht
OpleidingBiologie en Medisch Laboratorium Onderzoek
AfdelingLife Sciences en Chemistry
PartnersVrije Universiteit Amsterdam
Jaar2008
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk