De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Validatie van multiplex real time Q-PCR voor detectie van Blastocystis species en Dientamoeba fragilis in feces

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Validatie van multiplex real time Q-PCR voor detectie van Blastocystis species en Dientamoeba fragilis in feces

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Blastocystis species en Dientamoeba fragilis (D. fragilis) zijn twee vaak
voorkomende maar controversiële damparasieten[1]. Infecties van deze parasieten
worden geassocieerd met buikpijn, wijziging van de stoelgang en een opgeblazen
gevoel dat lijkt op het prikkelbare darm syndroom (PDS)[2,3]. Het doel van dit project
was het opzetten en valideren van een multiplex real time kwantitatief Polymerase
Chain Reaction (Q-PCR) voor de detectie van Blastocystis en D. fragilis in feces. De
verwachting was dat deze methode leidt tot het vaker vinden van Blastocystis en D.
fragilis dan met het huidige semi-kwantitatieve (licht)microscopische onderzoek.
De validatie van de multiplex real time Q-PCR was in twee fases bewerkstelligd. In
fase één werd de technische validatie uitgevoerd. Dit bestond uit een
efficiëntiebepaling uitgaande van een verdunningsreeks met een positieve controle.
Deze bepaling werd eerst in singleplex en vervolgens in een multiplex setting
gevalideerd. Bij de tweede fase, de klinische validatie, zijn 108 fecesmonsters,
verdeeld over 50 mannen en 58 vrouwen (minimum leeftijd 1 jaar en maximum
leeftijd 89 jaar), van patiënten met gastro-intestinale klachten geanalyseerd. Hierbij
zijn vergelijkingen gemaakt tussen de multiplex real time Q-PCR resultaten en de
originele microscopische resultaten. De fecesmonsters werden geleverd door het
Laboratorium Parasitologie in het Havenziekenhuis te Rotterdam.
De resultaten laten zien dat het multiplex real time Q-PCR technisch een efficiëntie
heeft van 105% voor Blastocystis en 108% voor D. fragilis. In de klinische monsters
is met de real time Q-PCR methode 30 maal Blastocystis species, 7 maal D. fragilis
en 9 maal dubbele infecties gevonden. Na de vergelijking met het microscopische
onderzoek, waar 30 maal Blastocystis species, 5 maal D. fragilis en 4 maal dubbel
infecties gevonden waren, kan geconcludeerd worden dat de gevalideerde multiplex
real time Q-PCR zeer sensitief is en specifiek genoeg om in de routine diagnostiek
toegepast te worden. De semi-kwantitatieve (licht)microscopie is echter de goude
standaard en zal niet vervangen worden door de real time Q-PCR als eerstelijns
onderzoek, omdat in de patiënten populatie van het Havenziekenhuis en Erasmus MC een
compleet panel van darmparasieten onderzocht moet worden. De nieuwe moleculaire
methode zal gebruikt worden bij specifieke verdenking en controle na therapie.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
OpleidingBiologie en Medisch Laboratoriumonderzoek-Breda
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersErasmus MC te Rotterdam
Datum2013-03-22
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk