De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

CRISPR interference to model the Koolen-de Vries Syndrome in iNeurons derived form iPSCs

Rechten: Alle rechten voorbehouden

CRISPR interference to model the Koolen-de Vries Syndrome in iNeurons derived form iPSCs

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

The Koolen-de Vries Syndrome (KdVS) is a neurodevelopmental disorder, also called the 17q21.31 microdeletion syndrome, which is characterized by intellectual disability, developmental delay, epilepsy, hypotonia and distinct facial features.6 The main causative gene for this disease is the KANSL1 gene, which is part of the non-specific lethal (NSL), is involved in the acetylation of histone H4 lysine 16 (H4K16), an epigenetic process that is mainly important during development and mitosis.3,7 In order to study the pathogenesis of the KdVS, we used a cell line of induced pluripotent stem cells (iPSCs) wherein the KANSL1 gene was supposed to be knocked down by the sequence specific CRISPR interference (CRISPRi) technology. This technology is based on the co-expression of catalytically deficient endonuclease dead Cas9 protein (dCas9) and a sequence specific single guide RNA (sgRNA) that together form a complex, enabling sequence specific gene silencing of any gene complementary to the sgRNA.1 Transformation of the KANSL1 deficient cells into induced neurons (iNeurons) would allow us to investigate the pathogenesis of the disease during development. In order to integrate the dCas9 gene in iPSCs, we used two different constructs with an EF1alpha promoter and a doxycycline inducible promoter. However, lentiviral delivery of these constructs did not result in dCas9 expression. Now we have a CRISPRi WTC cell line of iPSCs (obtained from Mandegar et al. 2016) that enables dCas9 expression, which was proven by means of immunostainings. This allows us to test the sgRNAs for performing CRISPRi in iPSCs.

Samenvatting
Het Koolen-de Vries Syndroom (KdVS) is een neuro-ontwikkelingsziekte, ook wel bekend als het 17q21.31 microdeletie syndroom, die wordt gekenmerkt door verstandelijke beperking, ontwikkelingsachterstanden, epilepsie, hypotonie en afwijkende gezichtskenmerken. Het belangrijkste gen dat verantwoordelijk is voor de ziekte is het KANSL1 gen dat deel uitmaakt van het non-specific lethal (NSL) complex en is betrokken bij de acetylatie in histoon H4 lysine 16 (H4K16). Dit is een belangrijk epigenetisch proces, vooral tijdens de ontwikkelingsfase en mitose van cellen.3,6 Het doel van het project was om de pathogenese van het KdVS te kunnen bestuderen door middel van het maken van een cellijn van induced pluripotent stem cells (iPSC’s). Daarin wordt het KANSL1 uitgeschakeld aan de hand van CRISPR interference (CRISPRi). Dit systeem is gebaseerd op de co-expressie van katalytisch deficiënt endonuclease dead Cas9 (dCas9) wat een complex vormt met het target specifieke single guide RNA (sgRNA) en zorgt voor het inactiveren van het target gen.1 Het idee is om deze KANSL1 deficiënte cellen te transformeren naar neuronen wat het analyseren van de pathogenese tijdens de ontwikkeling van neuronen mogelijk maakt. De iPSC’s werden getransduceerd met twee verschillende constructen om het dCas9 gen in het genoom van de cellen te integreren. Beide constructen bevatten een andere promotor, namelijk een EF1alfa promotor en een doxycycline induceerbare promotor. Echter heeft de lentivirale transductie van het dCas9-virus niet geleid tot de expressie van het dCas9 eiwit. Inmiddels maken we gebruik van een CRISPRi WTC cellijn van iPSC’s (afkomstig van Mandegar e.a., 2016) waarin het dCas9 eiwit wel tot expressie komt. Dit is bewezen middels immunocytochemie. Hierdoor kan het project voortgezet worden door verschillende sgRNA’s te testen om CRISPRi in iPSC’s te introduceren zodat het KANSL1 gen uitgeknokt wordt.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
OpleidingBiologie en Medisch Laboratoriumonderzoek-Breda
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersRadboudumc
Jaar2016
TypeBachelor
TaalOnbekend

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk